Приобретение новой колонки ВЭЖХ является достаточно обычной процедурой для специалиста, работающего на жидкостном хроматографе. Опытный хроматографист знает, что через 2-4 месяца интенсивной правильной эксплуатации колонки производства любой фирмы она обычно выходит из строя. Причин этому множество: деструкция привитой фазы и разрушение силикагелевой матрицы (особенно при использовании ион-парных реагентов, водных подвижных фаз при рН ниже 2.5 и выше 7), необратимая сорбция некоторых компонентов анализируемых проб, случайные резкие повышения и падения давления (вызывающие разрушения слоя сорбента из-за гидравлических ударов), превышение предельного для данной колонки давления и т.д.

Выход колонки из строя обнаруживается по многим характерным признакам: резкому падению эффективности, изменению времен удерживания по сравнению с новой колонкой, появлению хвостов или двоения пиков, резкому повышению давления при работе и т.п.

Следует отметить, что нередко допускают ошибки, сокращающие срок нормальной работы колонок, даже опытные хроматографисты.

Целью настоящей инструкции является предостеречь Вас от некоторых наиболее распространенных в практике ВЭЖХ ошибок и этим продлить срок жизни Ваших колонок.

НИКОГДА не разбирайте колонку без крайней необходимости. Помните, что сорбент в колонке со стороны детектора (фитинг с меткой D) находится в сжатом состоянии, поэтому разворачивание фитинга D всегда приводит к потере части сорбента и быстрому выходу колонки из строя из-за последующего проседания сорбента при начале работы.

НИКОГДА не подвергайте колонку ударам, резкому нагреву или охлаждению (особенно местному) - это разрушает слой сорбента.

НИКОГДА не используйте растворители с рН менее 2.5 и более 7, т.к. силикагелевая матрица сорбентов при этом быстро разрушается. При близких к крайним значениям рН для уменьшения растворения сорбента устанавливайте до инжектора насыщающие колонки с крупнозернистым (60-200 мкм) силикагелем или обратнофазным сорбентом.

НИКОГДА не работайте с колонками большой длины и сорбентами зернением 3-5 мкм при больших расходах высоковязких растворителей - высокое давление быстро разрушает колонку, уплотнения поршней, клапана и механическую часть насоса. Например, для колонки 4х250 мм с обратнофазным сорбентом зернением 5 мкм теория дает давление более 50 МПа при расходе растворителя метанол/вода (70/30) 2 мл/мин.

НИКОГДА не используйте для работы растворители и пробы, содержащие механические взвеси, хранившиеся длительное время, имеющие опалесценцию или состав которых неизвестен - вылейте их и приготовьте свежие растворители и образцы!

НИКОГДА не переключайте инжектор при вводе пробы медленно или с задержкой в среднем положении - это приводит к резким гидравлическим ударам (особенно сильным, если в системе нет демпфера) и быстро разрушает колонку.

НИКОГДА не отсоединяйте колонку от инжектора, пока давление не упадет до 0 - резкое падение давления на входе в колонку приводит к гидравлическому удару и разрушению слоя сорбента. То же самое происходит, если Вы слабо затянули пластиковую феррулу (конус) и при работе колонку сорвало высоким давлением.

НИКОГДА не оставляйте колонку на длительное время в растворителях, которые могут служить средой для роста микроорганизмов (например, в фосфатных буферных растворах) или же являются сильно коррозионными (например, содержат ионы хлора). Всегда заменяйте эти растворители при перерывах в работе на инертные и безопасные, например, изопропанол - это хотя и потребует затрат времени, но сохранит Вашу колонку.

ВСЕГДА старайтесь защитить колонку и продлить срок ее работы с помощью фильтров и наборов для фильтрации разного типа, предколонок, защитных и насыщающих колонок.

ВСЕГДА в случае возникновения необычных или непонятных для Вас ситуаций с колонками, особенно новыми, обращайтесь за консультациями к опытным коллегам или в нашу компанию.