Устройство жидкостного хроматографа. Техники элюирования
Хроматограф как блочно-модульный прибор. Типы насосных систем, детекторов, инжекторов, термостатов. Функции каждого блока. Возможности их комбинирования в зависимости от задачи. Техники элюирования: изократическая и градиентная. Преимущества и недостатки каждой техники. Особенности градиентного элюирования
Общие рекомендации к проведению хроматографического анализа. Уход за прибором и колонками, устранение простейших неполадок
Общие рекомендации к проведению хроматографического анализа. Организация рабочего места. Приготовление элюента. Заполнение насосной системы элюентом. Замена одного элюента на другой, смешивающийся или несмешивающийся с предыдущим. Фильтрация пробы. Применение ин-лайн фильтров и предколонок
Периодический уход за прибором. Уход за хроматографическими колонками
Поиск и устранение причин неудовлетворительной работы прибора. Возможные причины: нестабильного потока, высокий шума, дрейфа, плохой повторяемости, высокого давленич в системе
Виды хроматографии. Как происходит удерживание и разделение?
Химизм процессов, происходящих в хроматографической системе. Как происходит удерживание и разделение. Режимы адсорбционной хроматографии: обращенно-фазовый, нормально-фазовый, гидрофильный, с переносом заряда, ионообменный, лигандообменный; смешанные режимы. Ион-парный обращенно-фазовый режим. Эксклюзионная хроматография
Как выбрать подходящую неподвижную фазу? Типы неподвижных ВЭЖХ фаз
Зависимость адсорбционных свойств соединения от его химической структуры. Выбор режима элюирования, обеспечивающего разницу адсорбционных свойств у разделяемых компонентов.
Химизм ВЭЖХ фаз: адсорбенты на основе силикагеля, полимерных и углеродных материалов. Архитектура фаз: полностью пористые, поверхностно-пористые, непористые частицы, монолиты, пелликулярные фазы, фазы с ограниченно доступной поверхностью (RAM). Фазы для высокотемператрурной хроматографии. Хиральные ВЭЖХ фазы (CSP): Пиркловского типа, на основе модифицированных сахаридов, на основе привитых макролидных антибиотиков
Компоненты подвижной фазы. Как выбрать оптимальный состав подвижной фазы?
Как происходит удерживание? Каким образом состав подвижной фазы непосредственно влияет на величину удерживания? Компоненты подвижной фазы: основа, добавка, модификатор. Традиционные композиции подвижных фаз в обращенно-фазаой, нормально-фазовой и гидрофильной хроматографии. Регулирование удерживания. Зависимость фактора удерживания от концентрации добавки. Уравнение Скотта. Неклассические зависимости и их интерпретация. Регулирование селективности. Гибкие и не гибкие хроматографические системы
Способы подтверждения правильности идентификации пиков
Задача качественного анализа. Верный, ложноположительный и ложноотрицательный результаты идентификации. Иденитификация пиков на хроматограмме. Способы подтверждения правильности идентификации. Анализ формы пика без добавки с добавкой стандарта. Анализ спектральной информации. Спектральные отношения. Тест на чистоту пика. Применение нескольких хроматографических систем с различной селективностью разделения. Применение хроматографической колонки с большей эффективностью. Применение более селективного детектора
Оптимизация разделения
Теория Мартина-Синджа. Основные параметры разделения: удерживание (tR. tR’, k’), селективность (a), эффективность (N, n). Связь разрешения двух пиков (Rs) с селективностью, эффективностью и удерживанием. Теория скоростей. ВЭТТ. Зависимость Ван-Деемтера, коэффициенты A, B, C; массоперенос в хроматографической системе.
Основные задачи оптимизации: ускорение разделения при необходимом разрешении, улучшение разрешения за минимимальное время. Критерии оптимизации. Минимальное разрешение критической пары. Минимальное разрешение. Зависимость времени анализа от минимальной эффективности. Запас по разрешению и запас по давлению как ресурсы для сокращения времени анализа. Общий алгоритм оптимизации. Выбор размера хроматографической колонки
Валидация методик
Роль и задачи валидации. Валидационные характеристики. Подтверждение устойчивости (robustness) методики. Градуировка; линейная аппроксимация, потверждение диапазона линейности. Расчет LOD (предела обнаружения) и LLOQ (предела определения). Проверка повторяемости; проверка точности методом «введено-найдено».
Адсорбционные методы подготовки пробы. Твердофазная экстракция (ТФЭ)
Абсорбционная очистка и твердофазная экстракция. Преимущества и недостатки адсорбционных методов подготовки пробы. Возможности ТФЭ. Способы реализации офф-лайн и он-лайн ТФЭ. Основные шаги процедуры ТФЭ. Разработка ТФЭ методик. Кривая проскока, объем проскока. Типы адсорбционных материалов для ТФЭ. Многослойные колонки для ТФЭ
На все интересующие Вас вопросы мы ответим:
- по телефону +7 (495) 210-1888 или электронной почте
- на нашем форуме
